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多肽合成的基本原理?
多肽固相合成法是多肽合成化学的一个重大的突破。它的最大特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,进而为多肽合成的自动化奠定了基础。目前全自动多肽的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下: 基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标多肽的C-端氨基酸的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一氨基酸的氨基作为多肽合成的起点,同其它的氨基酸已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到多肽。根据多肽的氨基酸组成不同,多肽后处理方式不同,纯化方式也有差异。
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多肽定制服务的质量如何控制?
吉尔的多肽严格按照ISO质量管理体系进行生产,对每条多肽都进行唯一的编号管理,对粗品,纯化收集液以及最终冻干品进行三道HPLC以及MS检测分析,确保产品的正确性,产品的质量。
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吉尔多肽的生产能力以及交货时间如何?
公司直接从事多肽合成的一线人员增加至350人,另有一支250多人组成的高效液相色谱纯化队伍,公司每月产量达到10000条纯化肽,普通多肽可以一周时间交货,大部分可以二周内交货。数量从毫克到公斤级.
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常用什么方法生产多肽?
线性多肽肽链的延伸采用Fmoc固相合成法,由C端到N端逐步依次将氨基酸连接上。开始,将第一个氨基酸通过一段对酸敏感的连接物连接在不溶性的支撑物树脂上。用六氢吡啶将Fmoc保护基去掉后,第二个Fmoc保护的氨基酸被连接了上去,连接方法有预活化或“一锅煮”等。目标序列连接完毕后,用TFA将肽链从树脂上洗脱得到粗品。
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对不同的实验,如何选择肽的纯度?
肽的纯度是很重要的指标,纯度的选择取决于实验的目的。对不太灵敏的筛选实验,建议使用粗品或>75%,对免疫级别,建议选用>85%。对于受体与LIGAND相互作用的研究,生物ASSAY研究,或细胞水平的研究,建议>95%,对于结构研究,建议>98%。
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什么是多肽的净含量(肽含量),它的意义是什么?
干品多肽的重量中不仅仅包含多肽,还包含有一些非肽的组份,如水,被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比,这个百分比的数值范围很大,可能从50%到90%,取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法,不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈,它们是完全不同的两个概念。纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。
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如果我的肽纯度是95%,那么,其余的5%都是些什么物质?
多肽的纯度通常是通过HPLC,用每分钟1%的标准乙晴梯度来检测决定的。合成过程中,氨基酸之间的交联效率不是总能达到100%,因而产生一系列的氨基酸缺失的杂质。大多数这样的氨基酸缺失的杂质在纯化过程中都被去掉了,但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很相近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分。
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非HPLC纯化的多肽中有哪些杂质?
粗品和脱盐级别的多肽中多肽和非多肽类杂质:如非全长多肽和多肽后处理的一些原料如DTT、TFA等。
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多长的多肽为合适?
多肽合成需要考虑多肽的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着 降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然多肽功能区的序列是无法改变的,但是为了多肽的顺利合成,有时不得不在功能取的上下游增加一些辅助氨基 酸,以改善多肽的溶解性和亲疏水性。如果多肽太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的多肽在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的多肽,一般要有疏水的氨基酸,否则后处理难度加大。15个氨基酸残基以下的多肽一般都可以得到满意的产率和得率。
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如何从多肽序列中判定多肽的溶解性?
(1) 多肽中如果含有高比例的疏水性很强的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,多肽很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些氨基酸无论是纯化或合成,都有可能有问题。 (2) 一般情况下疏水性氨基酸的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的氨基酸的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在多肽的N或C短如果能增加极性氨基酸,也可以改善溶解性。
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